結果

與(yu)測試化合物孵育后脂質(zhi)(zhi)(zhi)CMC的(de)變化。帶負(fu)電(dian)荷的(de)脂質(zhi)(zhi)(zhi)diC8PS本質(zhi)(zhi)(zhi)上是兩親(qin)性(xing)的(de)，在水溶液中聚(ju)集并形成膠束，產生(sheng)(sheng)更(geng)親(qin)脂的(de)微環境。當Prodan與(yu)膠束相互作用(yong)時(shi)，其熒光(guang)發(fa)(fa)射發(fa)(fa)生(sheng)(sheng)了(le)變化。從diC8PS的(de)熒光(guang)濃(nong)度分布(bu)中觀察(cha)到不連續性(xing)（圖(tu)2），過渡脂質(zhi)(zhi)(zhi)濃(nong)度為其CMC（CMCL=1.1毫克(ke)/毫升；L-脂質(zhi)(zhi)(zhi)）。該CMC值與(yu)Vitovic在類似(si)測試條(tiao)件下使用(yong)表面張力方(fang)法測定的(de)值相似(si)。27當將測試化合物硫利扎定添加到基質(zhi)(zhi)(zhi)中時(shi)，復(fu)合物（CMCDL；DL，藥物脂質(zhi)(zhi)(zhi)復(fu)合物）的(de)CMC變為0.042 mg/mL(圖(tu)2)。在樣品中脂質(zhi)(zhi)(zhi)濃(nong)度高于0.5 mg/mL時(shi)，熒光(guang)信(xin)號被(bei)淬滅，給(gei)出較低的(de)值；但這(zhe)并不影(ying)響(xiang)CMC的(de)確(que)定。CMCDL和CMCL之(zhi)間的(de)比率被(bei)用(yong)來量(liang)化這(zhe)種轉(zhuan)變。

測(ce)(ce)定了45種(zhong)商業化合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)的藥物(wu)(wu)(wu)脂質復合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)的CMC值，并與(yu)在人(ren)類、動物(wu)(wu)(wu)或培養細(xi)胞中觀察到的PLD進(jin)行比(bi)較（表(biao)1）。正如文獻中所建議(yi)的那(nei)樣(yang)，這些化合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)分別分為四(si)類。19,27 CMC偏移的程度由CMC比(bi)率(lv)(lv)(CMCDL/CMCL)表(biao)示（圖(tu)3）。將來(lai)自人(ren)類、動物(wu)(wu)(wu)或培養細(xi)胞的PLD數據與(yu)使用這種(zhong)熒光方法檢測(ce)(ce)到的CMC偏移進(jin)行比(bi)較（圖(tu)3）并使用CMC比(bi)率(lv)(lv)在 

作為截(jie)止值0.75，大多數化(hua)(hua)合物在(zai)體內和(he)體外數據之間表(biao)現出一致的排(pai)名(ming)，除了兩(liang)個：華(hua)(hua)法林和(he)氨氯地平。據報(bao)道，華(hua)(hua)法林20和(he)氨氯地平10體內PLD較低(di)或沒有，但在(zai)該熒光測定(ding)中觀察(cha)到(dao)CMC變(bian)化(hua)(hua)。

濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)依(yi)(yi)(yi)賴(lai)性(xing)。體內研究中(zhong)(zhong)(zhong)PLD的(de)(de)(de)(de)(de)程度(du)(du)(du)(du)是(shi)劑(ji)量依(yi)(yi)(yi)賴(lai)性(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)。24,33在體外試驗中(zhong)(zhong)(zhong)，濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)控制可用于(yu)估(gu)計劑(ji)量依(yi)(yi)(yi)賴(lai)性(xing)。一(yi)(yi)(yi)組七種(zhong)(zhong)報(bao)告的(de)(de)(de)(de)(de)PLD誘(you)導劑(ji)分別以(yi)三種(zhong)(zhong)不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)進行了測(ce)試：910、91和(he)(he)9.1μM（圖4）。對(dui)于(yu)氯喹和(he)(he)酮(tong)康(kang)唑，要(yao)么(me)它(ta)們(men)(men)在10 mM時(shi)不(bu)能完全溶解在DMSO中(zhong)(zhong)(zhong)，要(yao)么(me)在使用10 mM DMSO儲備(bei)液(ye)時(shi)與緩沖(chong)液(ye)混合(he)后鹽析出(chu)來(lai)，它(ta)們(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)高濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)點被去除。所有(you)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)都(dou)表現出(chu)對(dui)CMC的(de)(de)(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)依(yi)(yi)(yi)賴(lai)性(xing)，以(yi)不(bu)同程度(du)(du)(du)(du)改變PLD誘(you)導潛力。即使在910μM時(shi)，芬氟拉明似(si)乎也是(shi)一(yi)(yi)(yi)種(zhong)(zhong)弱誘(you)導劑(ji)，而(er)硫利達嗪在不(bu)同濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)之間顯(xian)示出(chu)顯(xian)著變化(hua)。根據(ju)該體外數據(ju)，在9.1μM的(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)低濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)下(xia)，七種(zhong)(zhong)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)沒(mei)有(you)一(yi)(yi)(yi)種(zhong)(zhong)似(si)乎能夠(gou)誘(you)導PLD。復合(he)自聚(ju)合(he)。與磷脂(zhi)(zhi)類似(si)，大多數PLD誘(you)導劑(ji)是(shi)兩親性(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)。盡管帶有(you)不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)電(dian)荷跡象(xiang)，但(dan)(dan)它(ta)們(men)(men)也可以(yi)聚(ju)集(ji)并形成膠(jiao)束。拉貝洛爾20,34和(he)(he)奎尼丁35被報(bao)道為PLD誘(you)導劑(ji)；然而(er)，在所應(ying)用的(de)(de)(de)(de)(de)測(ce)試條件下(xia)，我們(men)(men)無法確定任何一(yi)(yi)(yi)種(zhong)(zhong)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)脂(zhi)(zhi)質復合(he)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)CMC。獲(huo)得的(de)(de)(de)(de)(de)RFU值(zhi)等于(yu)或(huo)低于(yu)空白（含熒光探針但(dan)(dan)不(bu)含脂(zhi)(zhi)質的(de)(de)(de)(de)(de)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)）中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)值(zhi)。進一(yi)(yi)(yi)步研究了不(bu)同藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)但(dan)(dan)沒(mei)有(you)脂(zhi)(zhi)質（0 mg/mL脂(zhi)(zhi)質），并且在無脂(zhi)(zhi)質測(ce)定緩沖(chong)液(ye)中(zhong)(zhong)(zhong)，拉貝洛爾和(he)(he)奎寧(ning)的(de)(de)(de)(de)(de)CMC值(zhi)分別為26和(he)(he)20μM。這些CMC值(zhi)遠低于(yu)這些化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)在PLD篩選中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)測(ce)試濃(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)，并且懷疑化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)自聚(ju)集(ji)會干擾藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)脂(zhi)(zhi)質復合(he)物(wu)(wu)(wu)形成的(de)(de)(de)(de)(de)檢測(ce)，從而(er)使CMCDL無法確定。

代謝(xie)物誘(you)導的(de)(de)(de)(de)PLD。為了(le)(le)研(yan)究代謝(xie)對PLD的(de)(de)(de)(de)影響，選擇(ze)了(le)(le)10種(zhong)具(ju)有主(zhu)要代謝(xie)事件(jian)的(de)(de)(de)(de)化(hua)合(he)物，并使(shi)用報告的(de)(de)(de)(de)測(ce)定篩選了(le)(le)它(ta)們(men)的(de)(de)(de)(de)主(zhu)要代謝(xie)物，表(biao)(biao)現出(chu)不(bu)同的(de)(de)(de)(de)行為（圖5和表(biao)(biao)2）。去(qu)乙(yi)基(ji)胺(an)碘(dian)酮是胺(an)碘(dian)酮的(de)(de)(de)(de)主(zhu)要代謝(xie)物，其脂質(zhi)結合(he)能力比其母體(ti)高近10倍。對于(yu)氯(lv)喹、氯(lv)氮(dan)平(ping)和米安色(se)林，它(ta)們(men)的(de)(de)(de)(de)代謝(xie)物屬于(yu)PLD非誘(you)導劑(ji)組(zu)，與(yu)作(zuo)為誘(you)導劑(ji)的(de)(de)(de)(de)母體(ti)化(hua)合(he)物相矛盾。由于(yu)溶解度限制，8-羥(qian)基(ji)米安色(se)林和去(qu)甲基(ji)氯(lv)氮(dan)平(ping)的(de)(de)(de)(de)測(ce)試濃度為0.091 mM，低(di)于(yu)其母體(ti)化(hua)合(he)物的(de)(de)(de)(de)濃度(1 mM)。

表1

與(yu)它們的母體化合物(wu)相比，其他代(dai)謝(xie)物(wu)顯示(shi)出相當的PLD誘導潛力，而其他代(dai)謝(xie)物(wu)則沒有。

圖3.在pH 7.2的(de)(de)熒(ying)光測(ce)(ce)定中觀察(cha)到(dao)的(de)(de)CMC偏移（由藥物(wu)脂質復合物(wu)(DL)的(de)(de)CMC和單(dan)獨的(de)(de)脂質(L)的(de)(de)CMC之間的(de)(de)比率表(biao)示：CMCDL/CMCL）與體(ti)內(nei)人(ren)體(ti)內(nei)的(de)(de)比較體(ti)內(nei)動(dong)物(wu)或體(ti)外細(xi)胞PLD分(fen)析。CMCDL/CMCL的(de)(de)臨界值為0.75，將PLD誘導(dao)劑(ji)（b，體(ti)內(nei)測(ce)(ce)定；[，細(xi)胞測(ce)(ce)定）與PLD非誘導(dao)劑(ji)(9)分(fen)開(kai)，只(zhi)有兩個異常值：氨(an)氯地平和華法林(lin)。

圖4.CMC移位（通過將藥物-脂(zhi)質(zhi)復合(he)物（DL的CMC之間的比率表示）和單獨的脂(zhi)質(zhi)（L）的CMC：CMC測試(shi)化合(he)物與二FF erent科幻(huan)最終在濃度(du)樣(yang)品孔在pH7.2。

測定(ding)pH影響。PLD中(zhong)(zhong)的(de)脂質紊亂主要在構成酸(suan)性的(de)溶酶體(ti)區室(shi)中(zhong)(zhong)觀察(cha)到(dao)環境。為了模擬溶酶體(ti)條件，pH 4.8醋酸(suan)鹽在PLD篩選研(yan)究(jiu)中(zhong)(zhong)使用緩沖液，25種進行研(yan)究(jiu)使用上述相同的(de)程序商業化合(he)物(wu)（表(biao)1）對。大(da)多(duo)數化合(he)物(wu)在結果相似(si)兩種緩沖液中(zhong)(zhong)的(de)；然(ran)而，胺碘(dian)酮、氯(lv)米帕明、米安色(se)林和華法林給(gei)出了截(jie)然(ran)不(bu)同的(de)數據，將(jiang)前三種化合(he)物(wu)從(cong)PLD誘導劑(ji)(ji)轉移到(dao)非(fei)誘導劑(ji)(ji)，將(jiang)華法林劑(ji)(ji)轉移從(cong)非(fei)誘導到(dao)誘導劑(ji)(ji)，從(cong)pH 7.2到(dao)pH 4.8。

Delta-8使用新方法測試CMC，而不是表面張力測試法——摘要

Delta-8使用新方法測試CMC，而不是表面張力測試法——方法

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