細胞膜是(shi)由(you)蛋(dan)白質與膽固(gu)醇等(deng)分(fen)子(zi)(zi)鑲嵌在磷脂中的(de)典型雙分(fen)子(zi)(zi)層(ceng)結構。細胞膜仿生技(ji)術已經成(cheng)功實(shi)現(xian)(xian)在納(na)米(mi)(mi)顆(ke)粒以(yi)及納(na)米(mi)(mi)液滴表面(mian)修飾組(zu)裝，并實(shi)現(xian)(xian)體(ti)內的(de)長循環(huan)以(yi)及良好(hao)生物相(xiang)容性。典型的(de)細胞膜仿生技(ji)術是(shi)將剝離(li)后的(de)細胞膜直(zhi)接(jie)以(yi)磷脂雙分(fen)子(zi)(zi)層(ceng)的(de)形式包被于納(na)米(mi)(mi)顆(ke)粒或液滴表面(mian)。然(ran)而(er)由(you)于表面(mian)張力作用(yong)，細胞膜的(de)磷脂雙分(fen)子(zi)(zi)層(ceng)無法直(zhi)接(jie)包被在微(wei)米(mi)(mi)級(ji)的(de)氣泡表面(mian)。

本發(fa)明(ming)采用反復(fu)液(ye)氮冷凍(dong)-室溫融(rong)(rong)(rong)化(hua)的方(fang)(fang)式向血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)中(zhong)摻雜磷脂并(bing)得(de)到血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)囊泡(pao)(pao)(pao)。通(tong)(tong)過Langmuir-Blodgett膜(mo)(mo)(mo)(mo)天平測試得(de)到凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)中(zhong)的磷脂蛋白(bai)質分子(zi)在(zai)氣液(ye)界面的表面張力顯著(zhu)降低(di)，通(tong)(tong)過差適量(liang)熱掃描技術測試表明(ming)摻雜后的血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)玻璃(li)態轉變溫度降低(di)。利用超聲(sheng)輔助的方(fang)(fang)式向血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)囊泡(pao)(pao)(pao)中(zhong)鼓入六氟(fu)化(hua)硫氣體，在(zai)氣液(ye)界面形成血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)微泡(pao)(pao)(pao)。通(tong)(tong)過熒(ying)光標記的方(fang)(fang)式定位血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)蛋白(bai)，并(bing)成功示(shi)蹤(zong)其(qi)(qi)融(rong)(rong)(rong)合(he)(he)在(zai)血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)微泡(pao)(pao)(pao)。通(tong)(tong)過對血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)囊泡(pao)(pao)(pao)以及(ji)血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)微泡(pao)(pao)(pao)進行蛋白(bai)質組學分析，發(fa)現血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)微泡(pao)(pao)(pao)繼承了血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)囊泡(pao)(pao)(pao)61.4%的蛋白(bai)質種類，并(bing)維持了血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)表面的整(zheng)合(he)(he)素(su)αIIβ3活化(hua)的構象(xiang)。在(zai)大(da)鼠下腔靜脈(mo)急慢(man)(man)性(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)模型實驗中(zhong)，血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)微泡(pao)(pao)(pao)能夠特異性(xing)識(shi)別急性(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)，其(qi)(qi)對于急性(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)診斷平均信(xin)噪比為(wei)12.47 dB，而(er)慢(man)(man)性(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)為(wei)0.1dB。

細胞膜(mo)表面(mian)張力調控方(fang)法(fa)示意圖；

不同磷脂配方的脂質體對氣液界面表面張力調(diao)控(kong)效應(ying)的表(biao)面(mian)壓力與面(mian)積等溫(wen)曲線圖(tu)；

不同蛋白(bai)質與(yu)磷(lin)脂(zhi)質量(liang)比(bi)對氣液(ye)界(jie)面(mian)(mian)表(biao)面(mian)(mian)張力調(diao)控(kong)效應圖(tu)：A為(wei)牛血清白(bai)蛋白(bai)與(yu)磷(lin)脂(zhi)在氣液(ye)界(jie)面(mian)(mian)組裝的示意圖(tu)；B為(wei)不同蛋白(bai)質與(yu)磷(lin)脂(zhi)質量(liang)比(bi)的氣液(ye)界(jie)面(mian)(mian)表(biao)面(mian)(mian)壓(ya)力與(yu)面(mian)(mian)積等溫曲線圖(tu)；C為(wei)不同蛋白(bai)質與(yu)磷(lin)脂(zhi)質量(liang)比(bi)的表(biao)面(mian)(mian)張力值(zhi)；

實施例：

1、血(xue)小板膜的提取(qu)：

首(shou)先從人、大鼠、小鼠、兔、牛、豬的(de)全(quan)血(xue)(xue)中選取血(xue)(xue)小板(ban)，所(suo)選的(de)磷(lin)(lin)脂為(wei)二棕(zong)櫚酸(suan)磷(lin)(lin)脂酰膽堿、二硬(ying)脂酸(suan)磷(lin)(lin)脂酰乙(yi)胺醇(chun)-聚(ju)乙(yi)二醇(chun)2000、硬(ying)脂酸(suan)、二硬(ying)脂酸(suan)磷(lin)(lin)脂甘油(you)的(de)組(zu)合；然后(hou)，在全(quan)血(xue)(xue)提取出的(de)血(xue)(xue)小板(ban)中，加入(ru)終濃度為(wei)42 mM的(de)甘露糖、終濃度為(wei)1μM的(de)前列(lie)腺(xian)素E1，和磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)蛋白酶(mei)抑制劑混合物，得到濃度為(wei)2×108

個/mL的(de)血小板(ban)懸(xuan)液。將血小板(ban)懸(xuan)液在(zai)-80°C冰(bing)箱(xiang)中冷凍1小時，隨后(hou)在(zai)37°C恒溫水浴箱(xiang)中融化，反(fan)復三次(ci)后(hou)于(yu)4°C，12000g條件下(xia)離心15分鐘得(de)到血小板(ban)膜懸(xuan)液，并用(yong)BCA蛋(dan)白(bai)定量試(shi)劑盒(he)定量蛋(dan)白(bai)質濃度，用(yong)磷脂試(shi)劑盒(he)定量磷脂濃度。

2、磷(lin)脂的(de)制備：

磷(lin)脂(zhi)按照二棕(zong)櫚(lv)酸(suan)磷(lin)脂(zhi)酰(xian)(xian)膽堿、二硬(ying)脂(zhi)酸(suan)磷(lin)脂(zhi)酰(xian)(xian)乙(yi)胺醇-聚乙(yi)二醇2000、硬(ying)脂(zhi)酸(suan)、二硬(ying)脂(zhi)酸(suan)磷(lin)脂(zhi)甘油的(de)(de)(de)以(yi)一(yi)系列質(zhi)(zhi)量比(bi)例(li)溶解在(zai)體積比(bi)為1：1的(de)(de)(de)氯仿和甲醇中，于50℃，100rpm的(de)(de)(de)條(tiao)件下(xia)旋(xuan)蒸(zheng)直到圓底(di)燒瓶(ping)底(di)部出現一(yi)層均勻的(de)(de)(de)薄膜(mo)(mo)，取下(xia)燒瓶(ping)，真空干燥(zao)8小(xiao)時。往干燥(zao)后的(de)(de)(de)燒瓶(ping)中加(jia)入(ru)磷(lin)酸(suan)緩沖液(ye)并在(zai)50℃、100 w、53 kHZ的(de)(de)(de)條(tiao)件下(xia)水浴超聲得(de)到脂(zhi)質(zhi)(zhi)體膜(mo)(mo)溶液(ye)，并調節脂(zhi)質(zhi)(zhi)體膜(mo)(mo)溶液(ye)的(de)(de)(de)PH為7.4。將血(xue)小(xiao)板膜(mo)(mo)與(yu)脂(zhi)質(zhi)(zhi)體在(zai)不同的(de)(de)(de)蛋白質(zhi)(zhi)磷(lin)脂(zhi)質(zhi)(zhi)量比(bi)例(li)下(xia)進(jin)行混合(he)。將混合(he)物(wu)在(zai)液(ye)氮和室溫下(xia)反復(fu)(fu)凍(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)6次得(de)到血(xue)小(xiao)板膜(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)物(wu)。將血(xue)小(xiao)板膜(mo)(mo)或血(xue)小(xiao)板膜(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)物(wu)轉移到置于冰上的(de)(de)(de)10 mL玻璃瓶(ping)中，將六氟化硫氣(qi)體吹入(ru)系統，用探針超聲處理(li)（300 W，5 s開(kai)/5 s關）將六氟化硫氣(qi)體分(fen)散到水性介質(zhi)(zhi)中4個循環(huan)分(fen)別得(de)到血(xue)小(xiao)板膜(mo)(mo)納泡(pao)以(yi)及血(xue)小(xiao)板膜(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)物(wu)微泡(pao)。

3、蛋白質磷脂復合物氣(qi)液界面(mian)張力調控：

采(cai)用Langmuir-Blodgett多功能(neng)膜天平測量所(suo)制(zhi)備磷脂復(fu)合(he)物(wu)在氣液界面(mian)(mian)處的(de)表(biao)面(mian)(mian)張力(li)。用微量注射器將20μL磷脂（1mg/mL脂濃度）氯仿溶液涂在Langmuir-Blodgett多功能(neng)膜天平上，使氯仿蒸發10分鐘。將表(biao)面(mian)(mian)的(de)初(chu)始面(mian)(mian)積設置為282 cm2

，并在(zai)(zai)20℃下以10 mm/min的速(su)率(lv)壓縮薄膜，記錄表面張力-表面積曲線。如圖2所示(shi)在(zai)(zai)一系列(lie)磷脂配方中，DSPE-PEG2000

的(de)摩爾(er)百分比為10%時在氣(qi)液(ye)界面具有最低的(de)表面張力(li)（3mN/m），DPPC：DPPG：DSPE-PEG2000

的(de)(de)比(bi)例為(wei)(wei)8：1：1的(de)(de)時候氣(qi)液(ye)界面(mian)的(de)(de)的(de)(de)表面(mian)壓力達到69mN/m，因此(ci)具(ju)有最低的(de)(de)氣(qi)液(ye)界面(mian)表面(mian)張力（2mN/m）。為(wei)(wei)了探究蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)與(yu)磷(lin)脂在(zai)氣(qi)液(ye)界面(mian)組裝的(de)(de)規(gui)律，如(ru)圖3中的(de)(de)A所(suo)示，選(xuan)用牛血清白(bai)(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)（BSA）作為(wei)(wei)標(biao)準蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)，配(pei)置(zhi)好一系列不同蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)與(yu)磷(lin)脂質(zhi)量比(bi)的(de)(de)磷(lin)脂蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)復合物(wu)，并用微量注射器將(jiang)20μL磷(lin)脂蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)復合物(wu)（1mg/mL脂濃度）氯(lv)仿溶液(ye)涂在(zai)Langmuir-Blodgett多功能膜天平上，使(shi)氯(lv)仿蒸發(fa)10分鐘。將(jiang)表面(mian)的(de)(de)初(chu)始(shi)面(mian)積設置(zhi)為(wei)(wei)282cm2

，并(bing)在20℃下(xia)以10 mm/min的(de)(de)(de)速率壓(ya)縮(suo)薄膜，記錄表面張力-表面積曲線。如(ru)圖(tu)3中的(de)(de)(de)B以及C所示在一系列具有(you)(you)不(bu)同(tong)質(zhi)量比(bi)(bi)的(de)(de)(de)磷(lin)脂(zhi)蛋白(bai)質(zhi)復(fu)合物中當蛋白(bai)質(zhi)比(bi)(bi)磷(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)質(zhi)量比(bi)(bi)為0.02時具有(you)(you)最低的(de)(de)(de)氣液界面表面張力。

4、血小(xiao)板膜-磷脂融(rong)合驗證(zheng)：

分(fen)(fen)別(bie)用(yong)過(guo)量(liang)(liang)(liang)(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)DiO和DiI對(dui)血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)囊泡(pao)(pao)(pao)和脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體進(jin)行(xing)染(ran)色，隨(sui)(sui)后(hou)用(yong)12000 g，15min，4℃的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)條件去除未嵌(qian)膜(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)染(ran)料。按(an)照不(bu)同蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)：磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)添加(jia)兩種膜(mo)(mo)(mo)材并在(zai)(zai)37℃恒溫箱中(zhong)(zhong)(zhong)共(gong)孵(fu)育(yu)30分(fen)(fen)鐘，取出后(hou)在(zai)(zai)液氮中(zhong)(zhong)(zhong)放置(zhi)1分(fen)(fen)鐘，隨(sui)(sui)后(hou)放置(zhi)于(yu)(yu)37℃融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)化，重復(fu)該循(xun)環5次。凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)循(xun)環后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物溶液置(zhi)于(yu)(yu)冰上(shang)，用(yong)功(gong)率(lv)為(wei)(wei)10 w，頻率(lv)為(wei)(wei)25 Khz的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)探頭超(chao)聲(sheng)，控(kong)(kong)制超(chao)聲(sheng)5秒(miao)開時間(jian)，5秒(miao)關時間(jian)，總時間(jian)為(wei)(wei)2分(fen)(fen)鐘，得到熒(ying)光標記血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物囊泡(pao)(pao)(pao)。在(zai)(zai)3 ml的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)石(shi)英比(bi)(bi)(bi)色皿加(jia)入2 ml水(shui)和20 ul樣品，用(yong)460 nm波長的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)激(ji)光作為(wei)(wei)激(ji)發(fa)光，接(jie)收(shou)480-680 nm的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)射(she)光。如圖4中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)A所示(shi)由于(yu)(yu)DiI與(yu)DiO分(fen)(fen)子在(zai)(zai)距離小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)于(yu)(yu)10 nm時會發(fa)生Foster熒(ying)光共(gong)振(zhen)能量(liang)(liang)(liang)(liang)轉移（FRET）現(xian)象，嵌(qian)在(zai)(zai)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)雙(shuang)分(fen)(fen)子層(ceng)中(zhong)(zhong)(zhong)疏水(shui)端的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)子彼此接(jie)近(jin)且小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)于(yu)(yu)10nm可以(yi)(yi)證明血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)與(yu)脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)進(jin)行(xing)了相(xiang)互的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)合(he)(he)(he)。如圖4中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)B所示(shi)，隨(sui)(sui)著蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)與(yu)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)降(jiang)低(di)(di)熒(ying)光共(gong)振(zhen)轉移現(xian)象逐(zhu)漸(jian)明顯，說明膜(mo)(mo)(mo)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)合(he)(he)(he)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)程度(du)增(zeng)大(da)。分(fen)(fen)別(bie)用(yong)過(guo)量(liang)(liang)(liang)(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)DiO和DiD對(dui)血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)囊泡(pao)(pao)(pao)和脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體進(jin)行(xing)染(ran)色，隨(sui)(sui)后(hou)用(yong)12000 g，15 min，4℃的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)條件去除未嵌(qian)膜(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)染(ran)料。將染(ran)色后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)囊泡(pao)(pao)(pao)以(yi)(yi)及脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體在(zai)(zai)蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)與(yu)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)為(wei)(wei)0.02時分(fen)(fen)別(bie)通(tong)過(guo)混(hun)合(he)(he)(he)孵(fu)育(yu)以(yi)(yi)及凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)兩種方式進(jin)行(xing)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)合(he)(he)(he)，通(tong)過(guo)流(liu)式細胞術來觀察兩者(zhe)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)合(he)(he)(he)效(xiao)率(lv)，如圖4中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)C所示(shi)，當血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)囊泡(pao)(pao)(pao)與(yu)脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體形成凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物可以(yi)(yi)有效(xiao)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)合(he)(he)(he)兩種組(zu)分(fen)(fen)。取不(bu)同膜(mo)(mo)(mo)蛋白(bai)(bai)：脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物微泡(pao)(pao)(pao)進(jin)行(xing)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)干，凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)干粉進(jin)行(xing)差示(shi)量(liang)(liang)(liang)(liang)熱掃描分(fen)(fen)析，掃描速(su)度(du)為(wei)(wei)5℃/min。如圖5所示(shi)，隨(sui)(sui)著摻雜磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)比(bi)(bi)(bi)例(li)(li)增(zeng)加(jia)，血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)玻(bo)璃(li)態(tai)轉變溫度(du)降(jiang)低(di)(di)，在(zai)(zai)蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)與(yu)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)為(wei)(wei)0.02時候具有最低(di)(di)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)玻(bo)璃(li)態(tai)轉變溫度(du)。血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)氣(qi)液界面(mian)張(zhang)力調控(kong)(kong)。使用(yong)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方法向血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)中(zhong)(zhong)(zhong)摻雜不(bu)同比(bi)(bi)(bi)例(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)，形成凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物，其組(zu)分(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)構成如圖6所示(shi)。向血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)中(zhong)(zhong)(zhong)摻雜不(bu)同比(bi)(bi)(bi)例(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)，形成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物在(zai)(zai)氣(qi)液界面(mian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)表面(mian)張(zhang)力隨(sui)(sui)著蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)與(yu)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)降(jiang)低(di)(di)而降(jiang)低(di)(di)，如圖7所示(shi)血(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)(he)物在(zai)(zai)蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)與(yu)磷(lin)(lin)(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)(liang)(liang)比(bi)(bi)(bi)為(wei)(wei)0.02時具有最低(di)(di)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)氣(qi)液界面(mian)表面(mian)張(zhang)力。

5、血小(xiao)板膜氣液(ye)界面組裝組分的定位(wei)：

血小板(ban)膜(mo)用(yong)(yong)Cy5.5進(jin)(jin)行(xing)蛋白標記，用(yong)(yong)于在(zai)氣(qi)液界面組(zu)(zu)裝過程(cheng)中進(jin)(jin)行(xing)組(zu)(zu)分定(ding)位。將血小板(ban)膜(mo)、血小板(ban)膜(mo)凍融復合物(wu)或血小板(ban)膜(mo)和脂質體的混合物(wu)在(zai)SF6

氣(qi)氛中(zhong)超聲(sheng)乳化。得(de)到(dao)的(de)(de)氣(qi)泡(pao)(pao)用(yong)于(yu)流式細胞術分析，在(zai)FSC/SSC門(men)控中(zhong)分離(li)所(suo)(suo)得(de)氣(qi)泡(pao)(pao)，并(bing)定量Q2和(he)(he)Q4區域的(de)(de)Cy5.5熒(ying)光，如圖8所(suo)(suo)示，相對于(yu)血(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)與脂質體的(de)(de)混(hun)合(he)(he)物(wu)使用(yong)血(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融復(fu)合(he)(he)物(wu)可以(yi)有(you)效將(jiang)血(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)組分組裝在(zai)微(wei)米氣(qi)泡(pao)(pao)上。對于(yu)熒(ying)光定位(wei)分析，用(yong)Cy5.5標記血(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)組分進行(xing)定向。將(jiang)所(suo)(suo)有(you)囊泡(pao)(pao)系統(tong)在(zai)超聲(sheng)處理(li)前以(yi)12000g離(li)心10分鐘(zhong)，超聲(sheng)處理(li)后(hou)以(yi)50g離(li)心10分鐘(zhong)，并(bing)通過小(xiao)(xiao)動物(wu)體內成像系統(tong)（IVIS）成像以(yi)檢測(ce)Cy5.5信號。超聲(sheng)處理(li)后(hou)，通過Zetasizer測(ce)量原始混(hun)合(he)(he)物(wu)和(he)(he)離(li)心管(guan)中(zhong)頂部或(huo)向下部分的(de)(de)粒徑(jing)。如圖9所(suo)(suo)示，使用(yong)血(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融復(fu)合(he)(he)物(wu)制(zhi)備的(de)(de)微(wei)泡(pao)(pao)中(zhong)檢測(ce)到(dao)標記血(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)的(de)(de)熒(ying)光分子Cy5.5。

6、制備過程產物形貌及電位表征：

采用(yong)透射電(dian)子(zi)顯(xian)微(wei)(wei)鏡對血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)、血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)、血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)納泡(pao)(pao)和(he)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)微(wei)(wei)泡(pao)(pao)的(de)(de)(de)形貌進行(xing)表(biao)征。將(jiang)所有(you)(you)(you)樣(yang)品稀釋至0.1 mg/mL（脂質濃度(du)）。將(jiang)10μL的(de)(de)(de)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)和(he)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)滴落(luo)到碳涂層銅網上(shang)。真(zhen)空干(gan)燥15分鐘后，用(yong)1%醋酸鈾對樣(yang)品進行(xing)負染。將(jiang)10μL的(de)(de)(de)PNBs和(he)PMBs在(zai)室溫下滴落(luo)在(zai)碳包覆的(de)(de)(de)銅網格上(shang)2 h，使其吸附到碳膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)表(biao)面(mian)。使用(yong)透射電(dian)子(zi)顯(xian)微(wei)(wei)鏡在(zai)100 kV的(de)(de)(de)加速電(dian)壓(ya)下檢(jian)查所有(you)(you)(you)樣(yang)品。如圖(tu)10所示，血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)（A）與(yu)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)（C）具有(you)(you)(you)典型的(de)(de)(de)磷脂雙分子(zi)層結(jie)(jie)構，而(er)在(zai)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)納米泡(pao)(pao)（B）以(yi)及(ji)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)微(wei)(wei)泡(pao)(pao)（D）具有(you)(you)(you)典型的(de)(de)(de)單分子(zi)層氣泡(pao)(pao)結(jie)(jie)構。通過Zetasizer測量血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)、血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)、血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)納泡(pao)(pao)和(he)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)微(wei)(wei)泡(pao)(pao)的(de)(de)(de)水(shui)合(he)(he)粒徑和(he)zeta電(dian)位(wei)，如圖(tu)11所示，血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)與(yu)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)納泡(pao)(pao)具有(you)(you)(you)相似的(de)(de)(de)zeta電(dian)位(wei)，在(zai)摻(chan)雜(za)磷脂后血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)以(yi)及(ji)血(xue)小(xiao)(xiao)板(ban)膜(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)融(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)物(wu)微(wei)(wei)泡(pao)(pao)的(de)(de)(de)zeta電(dian)位(wei)有(you)(you)(you)明顯(xian)降低降低為-47mV。

7、血小板膜(mo)凍融復合物微(wei)泡蛋白表(biao)征：

對(dui)制備的(de)(de)血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍(dong)融(rong)(rong)復合(he)(he)(he)(he)物(wu)與血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍(dong)融(rong)(rong)復合(he)(he)(he)(he)物(wu)微(wei)泡(pao)進(jin)行(xing)蛋白質組(zu)學分(fen)析，如圖(tu)12所(suo)示，血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍(dong)融(rong)(rong)復合(he)(he)(he)(he)物(wu)微(wei)泡(pao)繼承了血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍(dong)融(rong)(rong)復合(he)(he)(he)(he)物(wu)61.7%的(de)(de)蛋白質種類。將制備的(de)(de)血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍(dong)融(rong)(rong)復合(he)(he)(he)(he)物(wu)微(wei)泡(pao)與FITC標記的(de)(de)CD41抗體先渦旋混合(he)(he)(he)(he)2分(fen)鐘，再放于37°C中緩慢攪拌(ban)孵育30分(fen)鐘。平行(xing)組(zu)再用(yong)膜(mo)染料(liao)DiI非特異性地染磷脂(zhi)，取(qu)出后在200g，2分(fen)鐘的(de)(de)離(li)心條件將微(wei)氣(qi)泡(pao)與未結合(he)(he)(he)(he)的(de)(de)抗體分(fen)離(li)。取(qu)微(wei)氣(qi)泡(pao)稀釋20倍(bei)后滴于帶(dai)有凹槽的(de)(de)載玻(bo)(bo)片中，再蓋(gai)(gai)上蓋(gai)(gai)玻(bo)(bo)片，分(fen)別用(yong)484nm和(he)559nm的(de)(de)激發光(guang)源拍攝共聚焦顯微(wei)鏡。如圖(tu)13所(suo)示，在血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍(dong)融(rong)(rong)復合(he)(he)(he)(he)物(wu)微(wei)泡(pao)中來自(zi)血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)的(de)(de)綠色(se)熒光(guang)與來自(zi)脂(zhi)質體的(de)(de)紅色(se)熒光(guang)有效(xiao)共定位。

8、血小板膜凍(dong)融復合物微泡糖蛋白αIIbβ3蛋白質構象分析：

收集的血小(xiao)板靜置在(zai)Tyrode緩沖液(ye)中（5×105

）。將血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)或血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍融復(fu)合物(wu)(wu)微(wei)泡(pao)與生理鹽水或凝(ning)血(xue)酶（0.5 U/mL）在(zai)200μL終(zhong)體積的(de)Tyrode緩(huan)沖(chong)液中孵(fu)(fu)育(yu)15分(fen)(fen)鐘。然后用(yong)10μL PE-JON/A抗(kang)體在(zai)室(shi)溫下(xia)黑暗染色20 min，并在(zai)進行流式分(fen)(fen)析。免(mian)疫共(gong)沉淀(dian)實驗中用(yong)0.5 U/mL凝(ning)血(xue)酶刺激小(xiao)(xiao)(xiao)鼠血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)，加入裂解緩(huan)沖(chong)液終(zhong)止反應。然后將活化的(de)血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)裂解物(wu)(wu)、血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)裂解物(wu)(wu)、血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍融復(fu)合物(wu)(wu)裂解物(wu)(wu)和血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍融復(fu)合物(wu)(wu)微(wei)泡(pao)裂解物(wu)(wu)與抗(kang)β3抗(kang)體（50μg/mL）在(zai)4°C下(xia)孵(fu)(fu)育(yu)過夜。次日加入rProtein A/G磁(ci)(ci)珠吸收免(mian)疫復(fu)合物(wu)(wu)。將樣(yang)品在(zai)磁(ci)(ci)架上(shang)分(fen)(fen)離，并用(yong)裂解緩(huan)沖(chong)液洗(xi)滌6次。使(shi)用(yong)SDS-聚丙烯酰(xian)胺凝(ning)膠電(dian)泳和含有(you)β3和talin-1抗(kang)體的(de)蛋(dan)白(bai)質印跡分(fen)(fen)析免(mian)疫沉淀(dian)。如圖(tu)14所(suo)示(shi)，血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)膜(mo)凍融復(fu)合物(wu)(wu)微(wei)泡(pao)表(biao)面的(de)糖蛋(dan)白(bai)αIIbβ3具(ju)有(you)活化的(de)構象(xiang)，并且其活化不依賴(lai)血(xue)小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)(ban)(ban)內(nei)的(de)Talin-1蛋(dan)白(bai)。

9、急慢性(xing)血栓模型的構建：

用異氟烷(wan)麻醉(zui)大鼠(shu)，開腹后找到下腔靜脈，并(bing)(bing)用一段(duan)長為(wei)4 mm，寬(kuan)為(wei)2 mm的濾紙(zhi)條泡在20%的三(san)氯化(hua)鐵(tie)中(zhong)，取出后貼在下腔靜脈表面，1分鐘后取走濾紙(zhi)條，并(bing)(bing)用PBS重洗該(gai)處，構建(jian)(jian)大鼠(shu)急性(xing)血(xue)(xue)栓模型。在慢性(xing)血(xue)(xue)栓模型中(zhong)，大鼠(shu)的傷口縫合后在無(wu)菌環境下飼養10天，構建(jian)(jian)慢性(xing)血(xue)(xue)栓模型。

10、急慢(man)性血(xue)栓(shuan)模型的超聲分子影像診斷：

超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)造(zao)影(ying)設備采用GE公司生(sheng)產的(de)(de)(de)(de)(de)(de)LOGIQ E9型全身應用超(chao)(chao)高端彩(cai)超(chao)(chao)，首先選(xuan)用18MHz探頭機械(xie)指數MI調(diao)節為(wei)1.0，在(zai)B模(mo)(mo)(mo)式下(xia)對下(xia)腔靜脈進行(xing)造(zao)影(ying)，對血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)小(xiao)(xiao)及位(wei)置進行(xing)判斷，在(zai)多普勒模(mo)(mo)(mo)式下(xia)對血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)處的(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)(xue)(xue)流進行(xing)造(zao)影(ying)。用5 ml注(zhu)射(she)器(qi)抽取5 ml生(sheng)理鹽水(shui)加入到血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物微(wei)(wei)氣泡(pao)(pao)凍干粉(fen)中(zhong)(zhong)(zhong)，用力(li)震(zhen)蕩復(fu)溶形(xing)成(cheng)血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物微(wei)(wei)氣泡(pao)(pao)。將血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物微(wei)(wei)氣泡(pao)(pao)通過(guo)尾(wei)靜脈分(fen)(fen)別注(zhu)射(she)入大(da)鼠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)尾(wei)靜脈中(zhong)(zhong)(zhong)。再選(xuan)用9 MHz的(de)(de)(de)(de)(de)(de)探頭，機械(xie)指數MI調(diao)節為(wei)0.14，在(zai)對比增(zeng)強模(mo)(mo)(mo)式（CEUS）下(xia)對下(xia)腔靜脈進行(xing)造(zao)影(ying)，血(xue)(xue)(xue)(xue)管灌注(zhu)及血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)靶(ba)(ba)向(xiang)時的(de)(de)(de)(de)(de)(de)對比增(zeng)強超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)圖像(xiang)分(fen)(fen)析。連續采集(ji)5分(fen)(fen)鐘內的(de)(de)(de)(de)(de)(de)圖像(xiang)，并使(shi)用MATLAB軟(ruan)件(jian)對圖像(xiang)感興趣(qu)(qu)區域的(de)(de)(de)(de)(de)(de)信(xin)號強度進行(xing)分(fen)(fen)析，并根據超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)強度的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標尺來確定感興趣(qu)(qu)區域的(de)(de)(de)(de)(de)(de)超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)信(xin)號值。如圖15所(suo)示，在(zai)急(ji)(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)模(mo)(mo)(mo)型中(zhong)(zhong)(zhong)，血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物微(wei)(wei)泡(pao)(pao)能(neng)夠有(you)效靶(ba)(ba)向(xiang)急(ji)(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)，因此有(you)效低提高急(ji)(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)診斷的(de)(de)(de)(de)(de)(de)超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)信(xin)噪比。如圖16所(suo)示，在(zai)慢(man)(man)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)模(mo)(mo)(mo)型中(zhong)(zhong)(zhong)，血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物微(wei)(wei)泡(pao)(pao)在(zai)慢(man)(man)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)處無(wu)富集(ji)，其超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)信(xin)噪比沒有(you)顯(xian)著變化。通過(guo)對急(ji)(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)以及慢(man)(man)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)進行(xing)蘇木精-伊(yi)紅以及馬松染色(se)分(fen)(fen)析證明(ming)二者組分(fen)(fen)有(you)明(ming)顯(xian)差異(yi)，在(zai)急(ji)(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)中(zhong)(zhong)(zhong)以纖維蛋白(bai)為(wei)主而在(zai)慢(man)(man)性(xing)(xing)(xing)(xing)血(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)(shuan)中(zhong)(zhong)(zhong)以膠原為(wei)主，血(xue)(xue)(xue)(xue)小(xiao)(xiao)板膜(mo)凍融(rong)(rong)復(fu)合(he)(he)物微(wei)(wei)泡(pao)(pao)在(zai)二者診斷中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)平均(jun)超(chao)(chao)聲(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)信(xin)噪比有(you)顯(xian)著性(xing)(xing)(xing)(xing)差異(yi)。

綜上所述，本發明采用(yong)反復(fu)(fu)液(ye)氮冷凍(dong)(dong)(dong)-室溫融(rong)(rong)(rong)化的(de)(de)方式(shi)向血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)中(zhong)摻雜磷脂并得到血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物囊泡。通(tong)過Langmuir-Blodgett膜(mo)(mo)(mo)天平測(ce)試得到凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物中(zhong)的(de)(de)磷脂蛋白(bai)質分子在(zai)氣液(ye)界面的(de)(de)表面張力顯(xian)著降低，通(tong)過差適量熱掃描技(ji)術(shu)測(ce)試表明摻雜后的(de)(de)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)玻璃(li)態轉(zhuan)變溫度降低。利(li)用(yong)超聲輔助的(de)(de)方式(shi)向血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物囊泡中(zhong)鼓(gu)入六氟化硫氣體，在(zai)氣液(ye)界面形(xing)成(cheng)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物微(wei)(wei)泡。通(tong)過熒光標記(ji)的(de)(de)方式(shi)定(ding)位(wei)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)蛋白(bai)，并成(cheng)功示(shi)蹤其融(rong)(rong)(rong)合(he)(he)(he)在(zai)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物微(wei)(wei)泡。通(tong)過對(dui)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物囊泡以及血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物微(wei)(wei)泡進行蛋白(bai)質組學分析，發現血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物微(wei)(wei)泡繼承了(le)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物囊泡61.4%的(de)(de)蛋白(bai)質種類，并維持了(le)血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)表面的(de)(de)整合(he)(he)(he)素αIIβ3活化的(de)(de)構象。在(zai)大鼠下腔靜脈(mo)急慢性(xing)血(xue)(xue)(xue)栓(shuan)模型實驗(yan)中(zhong)，血(xue)(xue)(xue)小板膜(mo)(mo)(mo)凍(dong)(dong)(dong)融(rong)(rong)(rong)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物微(wei)(wei)泡能夠特異性(xing)識別急性(xing)血(xue)(xue)(xue)栓(shuan)，其對(dui)于急性(xing)血(xue)(xue)(xue)栓(shuan)診斷(duan)平均信噪比為12.47 dB，而慢性(xing)血(xue)(xue)(xue)栓(shuan)為0.1dB。