2、實驗材料和方法

2.1、材料

使(shi)用(yong)了一種陰(yin)離子表(biao)面(mian)活(huo)(huo)性(xing)劑(ji)(ji)和(he)(he)兩種非離子表(biao)面(mian)活(huo)(huo)性(xing)劑(ji)(ji)。陰(yin)離子表(biao)面(mian)活(huo)(huo)性(xing)劑(ji)(ji)是(shi)LAS（線(xian)性(xing)烷基苯磺酸鈉，WAKO Chemical Co.，用(yong)于JIS中的洗(xi)(xi)衣洗(xi)(xi)滌(di)劑(ji)(ji)測(ce)試，分析最低95%）。如下通過HPLC分析獲得碳數分布；C10：15.9%、C11：33.2%、C12：30.3%和(he)(he)C13：20.54%。

兩種非離子(zi)表面活性劑是AE8(Alcohol ethoxylate,EO:8,NIPPON SHOKUBAI Co.)和(he)AE9(Alcohol ethoxylate,EO:9,WAKO Chemical Co.)。AE8是一種市售的(de)用于洗衣洗滌(di)劑的(de)非離子(zi)表面活性劑，它含有約73%的(de)C12-AE8和(he)27%的(de)C14-AE8（通過(guo)HPLC測量）。

2.2、生物降解(jie)(jie)過(guo)程評價(jia)稀釋(shi)(shi)水按日本工業標(biao)準（JIS）K 01029-11配制(zhi)。使(shi)用BOD測(ce)試儀(yi)（TAITEC Co.）通過(guo)耗氧(yang)量(liang)(liang)法測(ce)量(liang)(liang)生物降解(jie)(jie)性(xing)變化。神奈川水再(zai)生中心提供的返還(huan)污泥在收集后不久就(jiu)被冷(leng)凍保(bao)存。曝氣48 h后的上清液(ye)(ye)用于試驗。將該上清液(ye)(ye)稀釋(shi)(shi)10倍，用玻璃纖維(wei)過(guo)濾器過(guo)濾。12.5 mL/L該液(ye)(ye)體用于生物降解(jie)(jie)試驗。生物降解(jie)(jie)率(lv)計算(suan)為(wei)BOD/ThOD（理論需氧(yang)量(liang)(liang)）。該ThOD值通過(guo)使(shi)用總(zong)氧(yang)分(fen)析儀(yi)(MODEL 1548 Yuasa Ionics Inc.)測(ce)量(liang)(liang)總(zong)需氧(yang)量(liang)(liang)(TOD)來確(que)認。

2.3、表面張力測量

將與BOD測(ce)(ce)試(shi)儀(yi)的(de)(de)實驗樣品(pin)含有相同種源和測(ce)(ce)試(shi)試(shi)劑的(de)(de)測(ce)(ce)試(shi)水制備在(zai)測(ce)(ce)試(shi)瓶中。將試(shi)瓶塞緊，將試(shi)液在(zai)20℃的(de)(de)避光(guang)培(pei)養箱中持續攪拌(ban)。在(zai)表面張力測(ce)(ce)量(liang)之前，以固定間隔取出一定量(liang)的(de)(de)樣品(pin)溶液。使用(yong)Wilhelmy天平方(fang)法EZ-Pi(KIBRON Inc.)的(de)(de)帶有鉑絲探針的(de)(de)自(zi)動(dong)表面張力計用(yong)于表面張力測(ce)(ce)量(liang)。

2.4、HPLC分析

2.4.1、LAS的固相(xiang)萃取和HPLC分析

從生物(wu)降(jiang)(jiang)解(jie)(jie)過程中取出的(de)液體樣品通過玻璃(li)纖維過濾(lv)(lv)器(1μm,47 mm,GL science)過濾(lv)(lv)。然后(hou)將提取物(wu)通過C18 Empore盤(GL Science)過濾(lv)(lv)以收集表面活(huo)性劑(ji)及其(qi)降(jiang)(jiang)解(jie)(jie)產物(wu)。從圓盤上除(chu)去水后(hou)，加入5 mL甲醇（Junsei Chemistry）以洗脫(tuo)分(fen)析樣品，其(qi)中包括(kuo)表面活(huo)性劑(ji)及其(qi)降(jiang)(jiang)解(jie)(jie)產物(wu)。該程序(xu)的(de)收集率約為80%。

使用(yong)(yong)紫外(wai)檢測器（UV-8010，Tosoh）和熒(ying)光檢測器（RF-535，Shimadzu）通過HPLC12分析(xi)LAS。ODS柱（Kaseisorb ODS2000 4.6?250 mm，Tokyo Chemical Industry）在柱溫40?C下使用(yong)(yong)。加入0.1 M NaClO4的(de)甲醇(chun)-水(45:55)用(yong)(yong)于流動相13)。流速為1.0 mL/min(ISOCRATIC)。

2.4.2、AE的固(gu)相萃取(qu)衍生(sheng)化

對AE進行了相同(tong)的固相萃取(qu)程(cheng)序。提(ti)取(qu)250μL AE-甲(jia)醇(chun)溶液置于試管中，減(jian)壓揮發(fa)甲(jia)醇(chun)。然后加入250μL二(er)氯(lv)甲(jia)烷(Junsei Chemistry)和內標C18醇(chun)(Junsei Chemistry)。為(wei)了獲(huo)得紫外線吸收(shou)，AE通過添加5μL異氰酸(suan)苯酯（Wako Pure Chemical Industries,Ltd.）衍生化，并在(zai)烘箱(xiang)中在(zai)55±2?C下加熱(re)45分鐘14,15。該程(cheng)序的收(shou)集(ji)率(lv)為(wei)約85%。

熱處(chu)理后，在試(shi)管(guan)中的(de)(de)樣品中加入250μL甲醇，作為分(fen)析樣品。通過與衍生(sheng)醇的(de)(de)HPLC峰（Junsei Chemistry）進行比較，確定了每個烷基鏈長度(du)的(de)(de)AE。

2.4.3、AE的HPLC分(fen)析(xi)條(tiao)件

使用(yong)與(yu)LAS分析(xi)相(xiang)同的色譜(pu)柱(zhu)，并使用(yong)UV-8010作為(wei)檢(jian)測(ce)器來(lai)分析(xi)AE。柱(zhu)溫保持在(zai)25?C，流動(dong)相(xiang)使用(yong)甲醇-水（8:2至10:0）。流速為(wei)1.5 mL/min（15分鐘(zhong)溶劑(ji)梯度(du)）。

2.5、急性水(shui)生(sheng)毒性試驗

大(da)型(xing)水蚤用于測試(shi)。為(wei)了使用最近24小時內出(chu)生的(de)幼蟲進行毒(du)(du)性(xing)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)，在試(shi)驗(yan)(yan)(yan)前(qian)(qian)24小時僅將成年(nian)生物轉(zhuan)(zhuan)移到繁殖容(rong)器中(zhong)(zhong)。Daphnia magna的(de)具體(ti)飼養方(fang)法(fa)在我們之前(qian)(qian)的(de)論(lun)文中(zhong)(zhong)有所(suo)描述3,4)。從生物降(jiang)解溶液(ye)中(zhong)(zhong)取出(chu)用于毒(du)(du)性(xing)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)的(de)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)溶液(ye)。每次試(shi)驗(yan)(yan)(yan)準(zhun)備四(si)個(ge)裝有10mL試(shi)液(ye)的(de)試(shi)管(guan)，每個(ge)試(shi)管(guan)中(zhong)(zhong)轉(zhuan)(zhuan)移5個(ge)試(shi)管(guan)。準(zhun)備兩個(ge)不(bu)含表面(mian)活(huo)性(xing)劑的(de)試(shi)管(guan)用于空白(bai)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)。試(shi)管(guan)保持在16 h/8 h的(de)明暗頻率條件下，20?C。48小時后對死亡(wang)和固(gu)定的(de)個(ge)體(ti)進行計數(shu)(shu)。死亡(wang)率的(de)計算(suan)方(fang)法(fa)是將死亡(wang)和無法(fa)活(huo)動的(de)人數(shu)(shu)除以(yi)總人數(shu)(shu)。48 h毒(du)(du)性(xing)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)中(zhong)(zhong)的(de)生物降(jiang)解會對毒(du)(du)性(xing)產生影響(xiang)，但(dan)在本研究中(zhong)(zhong)被忽略。

生物降解過程中對于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關系——摘要、簡介

生物降解過程中對于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關系——材料和方法

生物降解過程中對于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關系——結果與討論

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