3. 結果和討論

3.1. 表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)和(he)(he)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)電位面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)積等溫(wen)線(xian)。 表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)和(he)(he)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)電位 ? HI-Langmuir單層的(de)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)積等溫(wen)線(xian)如圖(tu)1所示。 表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)和(he)(he)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)電勢(shi)的(de)提(ti)升對應(ying)于750和(he)(he)900?2分(fen)子(zi) ? 分(fen)別為(wei)1。 與表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)相比，人(ren)們期望在(zai)更(geng)大的(de)表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)電勢(shi)區域觀察(cha)到升力(li)(li)(li)。 這(zhe)是由于表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)偶極子(zi)的(de)長程相互(hu)作用(yong)，而范(fan)德華相互(hu)作用(yong)主要由表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)測量。 關(guan)于極限分(fen)子(zi)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)積，即表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)線(xian)性部分(fen)的(de)外推 ? 零表(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)(li)的(de)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)積等溫(wen)線(xian)，值為(wei)620?2分(fen)子(zi) ? 獲(huo)得1。 該(gai)(gai)區域對應(ying)于空氣中(zhong)HI蛋白的(de)最緊密狀態 ? 水界(jie)面(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)(mian)，該(gai)(gai)值與先前發(fa)表(biao)(biao)的(de)關(guan)于牛胰(yi)島素Langmuir單層的(de)研究一致。3,17

圖1。 表(biao)面壓力( △) 表(biao)面電位 ? 區域( ○) 亞相pH值(zhi)5.6時人胰島素Langmuir單(dan)層的等溫線(xian)。

將分(fen)子面(mian)(mian)積(ji)從(cong)750減(jian)小，可以觀察(cha)到表(biao)(biao)面(mian)(mian)壓(ya)力下(xia)的(de)氣(qi)-液膨脹相(xiang)變 ? 面(mian)(mian)積(ji)等溫(wen)線(xian)。從(cong)585進一(yi)步降(jiang)低到350表(biao)(biao)明朗繆爾單(dan)層的(de)液體冷凝(ning)相(xiang)。一(yi)個(ge)達到坍(tan)塌(ta)表(biao)(biao)面(mian)(mian)壓(ya)力25.2mN m ? 1.坍(tan)塌(ta)前的(de)表(biao)(biao)面(mian)(mian)壓(ya)力測量(liang)顯(xian)示π線(xian)性增加 ? 等溫(wen)線(xian)。穩定性測量(liang)的(de)下(xia)一(yi)節將顯(xian)示HI-Langmuir單(dan)層在二維中是穩定的(de)。

圖2.三個壓(ya)縮 ? 在亞相pH值(zhi)5.6下，減壓(ya)循環達(da)到10（a）和30 mN/m（B）的人胰島素Langmuir單層表(biao)面壓(ya)力。

3.2.壓(ya)(ya)(ya)(ya)縮 ? 人胰(yi)島素Langmuir單(dan)(dan)層(ceng)的(de)減(jian)(jian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)周期(qi)和(he)(he)(he)穩定(ding)性(xing)等(deng)溫(wen)線。圖(tu)2A和(he)(he)(he)B顯(xian)示了壓(ya)(ya)(ya)(ya)縮 ? 在(zai)(zai)兩個目標表面(mian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)力（即10和(he)(he)(he)30 mN m）下測得的(de)減(jian)(jian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)循(xun)環(huan)(huan)(huan)等(deng)溫(wen)線 ? 1.選擇這(zhe)兩種表面(mian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)力的(de)基(ji)本原理(li)是(shi)觀(guan)察液體(ti)冷凝膜(mo)中膜(mo)在(zai)(zai)坍(tan)塌(ta)表面(mian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)力前后的(de)穩定(ding)性(xing)。壓(ya)(ya)(ya)(ya)縮后 ? 從0到10和(he)(he)(he)30 mN m的(de)減(jian)(jian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)循(xun)環(huan)(huan)(huan) ? 1，我(wo)們(men)觀(guan)察到初始壓(ya)(ya)(ya)(ya)縮和(he)(he)(he)最后減(jian)(jian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)（第三個循(xun)環(huan)(huan)(huan)）之間的(de)變化分別(bie)小(xiao)于5%和(he)(he)(he)10%。這(zhe)一(yi)結(jie)(jie)果表明HI蛋白仍保留在(zai)(zai)界面(mian)上(shang)。必(bi)須指出的(de)是(shi)，高達10 mN m的(de)循(xun)環(huan)(huan)(huan) ? 1顯(xian)示了等(deng)溫(wen)線的(de)重疊，這(zhe)支持(chi)(chi)了胰(yi)島素蛋白可(ke)能在(zai)(zai)液體(ti)膨脹和(he)(he)(he)濃縮階段保持(chi)(chi)其構(gou)象的(de)解釋。關于HI-Langmuir單(dan)(dan)層(ceng)的(de)穩定(ding)性(xing)（圖(tu)3），觀(guan)察到當單(dan)(dan)層(ceng)在(zai)(zai)10和(he)(he)(he)30 mN m保持(chi)(chi)恒定(ding)時，面(mian)積隨時間減(jian)(jian)少 ? 1在(zai)(zai)6500年代(dai)期(qi)間。測量到10和(he)(he)(he)30 mN m的(de)下降15%和(he)(he)(he)60% ? 1。崩(beng)塌(ta)后，崩(beng)塌(ta)表面(mian)壓(ya)(ya)(ya)(ya)力預計(ji)會大幅降低。通過BAM研(yan)究(jiu)HI聚集的(de)可(ke)能性(xing)，并將(jiang)HI與FITC結(jie)(jie)合，稍后將(jiang)討論。

圖(tu)3.在(zai)亞相pH值(zhi)5.6下(xia)，在(zai)表面壓力為10（A）和30 mN/m（B）的條件下(xia)，對人胰島素Langmuir單層膜進(jin)行90 min的穩(wen)定性測量。 

3.3.紫外線(xian)(xian) ? 人胰島素(su)在(zai)(zai)水(shui)相和Langmuir單層(ceng)膜中(zhong)的(de)(de)可(ke)見(jian)光(guang)(guang)譜(pu)和熒(ying)(ying)光(guang)(guang)光(guang)(guang)譜(pu)研究了HI在(zai)(zai)水(shui)溶液(ye)（pH 2）中(zhong)的(de)(de)光(guang)(guang)物理性(xing)質 和作(zuo)為(wei)(wei)Langmuir單層(ceng)，分別如(ru)圖(tu)4和圖(tu)5所(suo)(suo)示。圖(tu)4包(bao)括(kuo)溶液(ye)中(zhong)人胰島素(su)的(de)(de)吸收光(guang)(guang)譜(pu)和發(fa)射光(guang)(guang)譜(pu)。水(shui)HI（pH 2）的(de)(de)發(fa)射峰(feng) 當在(zai)(zai)270 nm處(chu)激發(fa)時(shi)，在(zai)(zai)305 nm處(chu)觀察到(dao)。該峰(feng)對應于(yu)(yu)HI中(zhong)存在(zai)(zai)的(de)(de)四(si)種酪氨酸氨基酸。該值與在(zai)(zai)pH值為(wei)(wei)7（即(ji)303）的(de)(de)其(qi)他工(gong)作(zuo)中(zhong)獲得的(de)(de)值相當 ? 然(ran)而，在(zai)(zai)空氣中(zhong)為(wei)(wei)305 nm.21 ? 水(shui)界面(mian)，在(zai)(zai)270 nm激發(fa)時(shi)未觀察到(dao)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)（圖(tu)5B）。觀察到(dao)的(de)(de)唯一峰(feng)是294 nm處(chu)的(de)(de)拉曼峰(feng)。這(zhe)可(ke)以解(jie)釋為(wei)(wei)HI濃度低（0.3 mg/mL） 這(zhe)是生成表面(mian)壓力等溫(wen)線(xian)(xian)所(suo)(suo)必需的(de)(de)。因(yin)此(ci)，由于(yu)(yu)HI作(zuo)為(wei)(wei)Langmuir單層(ceng)沒有(you)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)，因(yin)此(ci)無(wu)法在(zai)(zai)作(zuo)為(wei)(wei)Langmuir單層(ceng)的(de)(de)HI和溶液(ye)中(zhong)的(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)光(guang)(guang)譜(pu)之間(jian)進行關(guan)聯或比較。

圖(tu)4.紫外線 ? vis（5×10 ? 5米(mi)）和(he)(he)熒光（5×10 ? 7 M；λ激發(fa)=270 nm，激發(fa)和(he)(he)發(fa)射處的狹縫寬度，分(fen)別為5和(he)(he)5 nm）人胰島(dao)素水溶(rong)液的光譜。

通常蛋(dan)白質(zhi)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)芳香(xiang)族氨基酸(suan)在(zai)(zai)(zai)260左右出現(xian)峰(feng)(feng)(feng)值(zhi) ? 280 nm，220附近有一(yi)個(ge)峰(feng)(feng)(feng)，這(zhe)(zhe)是(shi)由(you)于(yu)肽鍵引起的(de)(de)(de)(de)。 圖(tu)5A所示的(de)(de)(de)(de)光(guang)譜在(zai)(zai)(zai)紫外光(guang)譜中(zhong)(zhong)(zhong)呈現(xian)出276 nm處(chu)(chu)的(de)(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)值(zhi) ? 由(you)于(yu)蛋(dan)白質(zhi)中(zhong)(zhong)(zhong)存(cun)在(zai)(zai)(zai)酪(lao)氨酸(suan)而產生的(de)(de)(de)(de)可見光(guang)譜。 除了(le)276nm處(chu)(chu)的(de)(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)外，由(you)于(yu)肽鍵的(de)(de)(de)(de)作用，蛋(dan)白質(zhi)預計(ji)在(zai)(zai)(zai)190nm處(chu)(chu)有一(yi)個(ge)強峰(feng)(feng)(feng)，在(zai)(zai)(zai)210和220nm之(zhi)間有一(yi)個(ge)弱峰(feng)(feng)(feng)。 在(zai)(zai)(zai)溶(rong)液中(zhong)(zhong)(zhong)，觀(guan)察到的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren)胰(yi)島(dao)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)唯一(yi)峰(feng)(feng)(feng)值(zhi)為276nm。 溶(rong)液中(zhong)(zhong)(zhong)不(bu)同濃度的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren)胰(yi)島(dao)素(su)(su)產生的(de)(de)(de)(de)光(guang)譜寬肩(jian)接(jie)近200 ? 220 nm，表(biao)(biao)(biao)明(ming)肽鍵引起的(de)(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)重(zhong)疊。 圖(tu)5A顯示了(le)人(ren)(ren)胰(yi)島(dao)素(su)(su)Langmuir單(dan)層(ceng)的(de)(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度光(guang)譜。 在(zai)(zai)(zai)空中(zhong)(zhong)(zhong) ? 在(zai)(zai)(zai)水(shui)界面(mian)，在(zai)(zai)(zai)224和276nm處(chu)(chu)觀(guan)察到兩(liang)個(ge)不(bu)同的(de)(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)，代(dai)表(biao)(biao)(biao)人(ren)(ren)胰(yi)島(dao)素(su)(su)中(zhong)(zhong)(zhong)存(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)肽鍵和酪(lao)氨酸(suan)。 當(dang)這(zhe)(zhe)兩(liang)個(ge)峰(feng)(feng)(feng)值(zhi)與(yu)增加的(de)(de)(de)(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)壓(ya)力對應時(shi)，它(ta)們(men)呈線性關(guan)系。 空氣中(zhong)(zhong)(zhong)吸(xi)光(guang)度的(de)(de)(de)(de)線性 ? 水(shui)界面(mian)表(biao)(biao)(biao)明(ming)HI單(dan)層(ceng)在(zai)(zai)(zai)崩塌(ta)點之(zhi)前的(de)(de)(de)(de)穩(wen)定性。

圖5.（A） 紫(zi)外(wai)線(xian) ? 亞(ya)相(xiang)pH值為5.6時人胰島(dao)素Langmuir的可見光譜。 插圖顯(xian)示了224和(he)276 nm處(chu)吸(xi)光度隨表面壓力(li)的變化。 （B） 亞(ya)相(xiang)pH 5.6下人胰島(dao)素朗繆(mou)爾的熒(ying)光光譜（λ激(ji)發=270 nm，激(ji)發和(he)發射時的狹縫寬(kuan)度分(fen)別為5和(he)5 nm）。

下(xia)一節將研(yan)究(jiu)HI-Langmuir單層(ceng)在二維域中潛在形成的地形。該觀(guan)察使用了兩種方法(fa)，即熒光(guang)法(fa)和布魯斯特角顯微鏡。22,23

3.4. 人(ren)胰(yi)(yi)(yi)島(dao)素(su)(su)(su)(su)朗繆爾單(dan)層的表(biao)觀(guan)熒光和布魯(lu)斯特角(jiao)顯微鏡觀(guan)察。 人(ren)胰(yi)(yi)(yi)島(dao)素(su)(su)(su)(su)Langmuir單(dan)層的形貌通過FITC人(ren)胰(yi)(yi)(yi)島(dao)素(su)(su)(su)(su)的表(biao)觀(guan)熒光進(jin)行檢(jian)查，而(er)布魯(lu)斯特角(jiao)顯微鏡用于2-D純人(ren)胰(yi)(yi)(yi)島(dao)素(su)(su)(su)(su)。由于胰(yi)(yi)(yi)島(dao)素(su)(su)(su)(su)是非(fei)熒光的，因此必須附加熒光團才能使(shi)用表(biao)觀(guan)熒光顯微鏡。 蛋白質(zhi)常用的探針是異硫氰(qing)酸熒光素(su)(su)(su)(su)（FITC）。

已知FITC胰島素的(de)(de)(de)比(bi)例（1:1），計(ji)算分子量，以制(zhi)備在(zai)(zai)空氣中攤鋪(pu)的(de)(de)(de)適(shi)當濃度的(de)(de)(de)水溶液(ye) ? 水界面。 在(zai)(zai)5、10、20和(he)30 mN m的(de)(de)(de)表(biao)(biao)面壓(ya)力下獲(huo)得了表(biao)(biao)面熒(ying)光(guang)(guang)顯微照片 ? 1，如(ru)表(biao)(biao)1所示。 在(zai)(zai)所有表(biao)(biao)面壓(ya)力下均觀(guan)(guan)察到(dao)(dao)均勻的(de)(de)(de)HI-Langmuir單(dan)層(ceng)，圖像(xiang)中未顯示μm范(fan)圍內的(de)(de)(de)疇的(de)(de)(de)形成。 為了驗證(zheng)(zheng)這(zhe)一觀(guan)(guan)察結果，采用布魯斯(si)特(te)角顯微鏡（BAM）在(zai)(zai)與表(biao)(biao)觀(guan)(guan)熒(ying)光(guang)(guang)顯微鏡相同(tong)的(de)(de)(de)壓(ya)力下對薄膜(mo)的(de)(de)(de)形貌(mao)進行成像(xiang)。 BAM數據證(zheng)(zheng)實了表(biao)(biao)觀(guan)(guan)熒(ying)光(guang)(guang)測量結果。 為了確保BAM系統正(zheng)常工(gong)作，對花生酸Langmuir單(dan)層(ceng)進行了檢(jian)查。 觀(guan)(guan)察到(dao)(dao)的(de)(de)(de)地形證(zheng)(zheng)實了已經公布的(de)(de)(de)結果（表(biao)(biao)1）

表(biao)1。 通過（A）HI-FITC-Langmuir單層樣品的表(biao)觀(guan)熒光測量了四種表(biao)面壓力； （B） BAM用于胰島(dao)素HI-Langmuir單層； （C） 花生酸Langmuir單層BAM（胰島(dao)素濃(nong)度(du)：0.30 mg/mL）

3.5. 胰島素的二級結(jie)構(gou)。 為了研(yan)究胰島素分子在2-D中相(xiang)(xiang)互作用的性質，通過(guo)紅外光譜(pu)檢查HI水相(xiang)(xiang)和(he)Langmuir單層。 研(yan)究了HI水相(xiang)(xiang)的FTIR和(he)圓二色譜(pu)（CD），而HI-Langmuir單層膜(mo)采用紅外反射吸收(shou)光譜(pu)（IRRAS）。

圖6。 （A） 在pH 2和(he)溫度20±1°C條件下，水性胰島(dao)素的圓二色(se)光(guang)譜和(he)（B）FTIR光(guang)譜。胰島(dao)素濃度分別為0.3和(he)2 mg-mL ? 分別為1。

如圖6A所示(shi)，與β-片相比，CD光譜包含高(gao)比例的(de)(de)α-螺(luo)旋。 它表明水相中存在(zai)(zai)單體(ti)且(qie)不存在(zai)(zai)聚集體(ti)。24圖6B顯示(shi)了水相HI的(de)(de)FTIR光譜，主峰位于(yu)(yu)1650、1542、1440和(he)1373 cm處 ? 1. 1650和(he)1542厘米處的(de)(de)峰值 ? 1對應于(yu)(yu)α-螺(luo)旋的(de)(de)酰胺I和(he)酰胺II區域。25 ? 27 CD和(he)FTIR光譜證實水性HI以α-螺(luo)旋存在(zai)(zai)，因此在(zai)(zai)水相中以單體(ti)形式存在(zai)(zai)。

圖(tu)7。 在亞相(xiang)pH 5.6條件(jian)下，使(shi)用60°入射角和改變表面(mian)壓力(li)，對人胰島(dao)素(su)Langmuir單層(ceng)膜進(jin)行p極(ji)化輻(fu)照。

IRRAS是(shi)研究(jiu)Langmuir單分子(zi)膜(mo)在空氣(qi)中(zhong)取(qu)向(xiang)(xiang)和構(gou)象變(bian)化的(de)(de)(de)(de)重(zhong)要技(ji)術 ? 水界(jie)面。 IRRAS測量值作為(wei)(wei)反射率獲得(de) ? 吸光度（RA）與(yu)波(bo)數。 RA定義為(wei)(wei) ? log10（R/RF），其中(zhong)R是(shi)薄膜(mo)覆蓋表面的(de)(de)(de)(de)反射率，RF是(shi)水的(de)(de)(de)(de)反射率。28 ? 30當(dang)振動(dong)與(yu)空氣(qi)平行時 ? 水界(jie)面，對于(yu)(yu)平行于(yu)(yu)入(ru)射面的(de)(de)(de)(de)p極化輻射，譜帶(dai)最(zui)初(chu)為(wei)(wei)負值，其強度隨著(zhu)入(ru)射角的(de)(de)(de)(de)增加而增加，直到布魯斯特角（2920 cm為(wei)(wei)54.5°） ? 30通(tong)過在不同表面壓力下(xia)使用(yong)(yong)IRRAS，我們研究(jiu)了(le)HI-Langmuir單層膜(mo)的(de)(de)(de)(de)取(qu)向(xiang)(xiang)和構(gou)象的(de)(de)(de)(de)變(bian)化（圖7、8和9）。 IRRAS用(yong)(yong)于(yu)(yu)分析蛋白(bai)質的(de)(de)(de)(de)結(jie)構(gou)特征，例如通(tong)過1700區域(yu)的(de)(de)(de)(de)酰胺I和酰胺II帶(dai)解釋的(de)(de)(de)(de)α-螺旋和β-折疊(die) ? 1600和1600 ? 1500厘米(mi) ? 分別為(wei)(wei)1.19,20

圖8。 在亞相pH值5.6和表面(mian)壓力(li)10 mN/m以及改(gai)變入射角的條件下，人胰島素Langmuir單層膜的p極化輻照。

給(gei)出了(le)三種IRRAS光(guang)譜。 圖7顯(xian)示了(le)不同(tong)表(biao)面壓(ya)(ya)(ya)力(li)下(xia)60°的極化(hua)，圖8顯(xian)示了(le)10 mN/m的恒(heng)定表(biao)面壓(ya)(ya)(ya)力(li)和30到70°范圍內的變化(hua)角度，圖9顯(xian)示了(le)25°恒(heng)定角度和變化(hua)表(biao)面壓(ya)(ya)(ya)力(li)下(xia)的s極化(hua)。 表(biao)2給(gei)出了(le)α-螺旋(xuan)和β-片的譜帶特征以(yi)及對應于α-螺旋(xuan)的酰胺I和酰胺II振動。

圖(tu)7顯示了HI-Langmuir單(dan)層在(zai)(zai)不同(tong)表面壓(ya)(ya)力(li)(li)下(xia)60°時的(de)(de)(de)p極(ji)化。 這條(tiao)帶(dai)子在(zai)(zai)1517厘(li)米(mi)(mi)(mi)處 ? 1對應(ying)于(yu)(yu)α-螺旋(xuan)(xuan)。 在(zai)(zai)1 mN/m的(de)(de)(de)表面壓(ya)(ya)力(li)(li)下(xia)，有(you)兩個(ge)可見帶(dai)：1652和(he)(he)(he)1637 cm ? 1. 隨著(zhu)表面壓(ya)(ya)力(li)(li)的(de)(de)(de)增加，這兩個(ge)譜(pu)(pu)帶(dai)重(zhong)疊并(bing)成為一(yi)個(ge)寬(kuan)帶(dai)。 在(zai)(zai)30百萬米(mi)(mi)(mi) ? 1，波段可視為單(dan)個(ge)波段，頻率為1648厘(li)米(mi)(mi)(mi) ? 1. 這是對應(ying)于(yu)(yu)α-螺旋(xuan)(xuan)的(de)(de)(de)酰胺(an)II區域的(de)(de)(de)條(tiao)帶(dai)。 下(xia)一(yi)個(ge)波段在(zai)(zai)1531厘(li)米(mi)(mi)(mi)處以(yi)1 mN/m的(de)(de)(de)寬(kuan)帶(dai)出(chu)現 ? 1. 隨著(zhu)表面壓(ya)(ya)力(li)(li)的(de)(de)(de)增加，它分(fen)(fen)成三(san)個(ge)帶(dai)：1550、1536和(he)(he)(he)1522厘(li)米(mi)(mi)(mi) ? 1. 在(zai)(zai)1550和(he)(he)(he)1522厘(li)米(mi)(mi)(mi)處的(de)(de)(de)頻帶(dai) ? 1分(fen)(fen)別(bie)對應(ying)于(yu)(yu)α-螺旋(xuan)(xuan)和(he)(he)(he)β-折疊中的(de)(de)(de)酰胺(an)II區域。 這種譜(pu)(pu)帶(dai)分(fen)(fen)裂(lie)表明，譜(pu)(pu)帶(dai)位于(yu)(yu)1531厘(li)米(mi)(mi)(mi)處 ? 在(zai)(zai)較(jiao)低的(de)(de)(de)表面壓(ya)(ya)力(li)(li)下(xia)，1由α-螺旋(xuan)(xuan)和(he)(he)(he)β-片組成。 在(zai)(zai)較(jiao)高(gao)的(de)(de)(de)表面壓(ya)(ya)力(li)(li)下(xia)，譜(pu)(pu)帶(dai)分(fen)(fen)離為離散的(de)(de)(de)單(dan)個(ge)峰。 光譜(pu)(pu)中出(chu)現的(de)(de)(de)其他峰是由于(yu)(yu)氨基(ji)酸和(he)(he)(he)烷烴鏈的(de)(de)(de)存(cun)在(zai)(zai)。 這條(tiao)帶(dai)子長1448厘(li)米(mi)(mi)(mi) ? 1對應(ying)于(yu)(yu)C ? H CH2和(he)(he)(he)CH3的(de)(de)(de)剪(jian)切。 HI-Langmuir單(dan)分(fen)(fen)子膜的(de)(de)(de)p-極(ji)化輻(fu)照度中存(cun)在(zai)(zai)所(suo)有(you)三(san)個(ge)表明α-螺旋(xuan)(xuan)的(de)(de)(de)主(zhu)譜(pu)(pu)帶(dai)。

圖9。 亞相(xiang)pH為5.6，入射(she)角(jiao)為25°，且改變表面(mian)壓力時，人胰島素Langmuir單(dan)層的s極化輻照。

圖8顯示(shi)了HI-Langmuir單層在(zai)10 mN m處的(de)(de)(de)(de)p極化(hua) ? 1在(zai)30、35、40、60、65和(he)(he)70°的(de)(de)(de)(de)六個不同角(jiao)度(du)(du)。 在(zai)布儒(ru)斯特角(jiao)之(zhi)前(qian)，30、35和(he)(he)40 mN/m處的(de)(de)(de)(de)角(jiao)未顯示(shi)出(chu)(chu)β片的(de)(de)(de)(de)特征(zheng)帶(dai)。 所(suo)有三(san)個角(jiao)度(du)(du)顯示(shi)1655和(he)(he)1540厘(li)米處的(de)(de)(de)(de)條紋 ? 1分別對應(ying)(ying)(ying)于(yu)酰(xian)胺I和(he)(he)酰(xian)胺II吸收。 這(zhe)條帶(dai)子在(zai)1517厘(li)米處 ? 1，對應(ying)(ying)(ying)于(yu)α-螺旋(xuan)，在(zai)35°和(he)(he)40°中(zhong)存在(zai)。 在(zai)布儒(ru)斯特角(jiao)之(zhi)后，所(suo)有60、65和(he)(he)70°的(de)(de)(de)(de)三(san)個角(jiao)都(dou)顯示(shi)出(chu)(chu)介于(yu)1650和(he)(he)1655之(zhi)間的(de)(de)(de)(de)帶(dai)，這(zhe)對應(ying)(ying)(ying)于(yu)α-螺旋(xuan)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)酰(xian)胺I吸收。 當角(jiao)度(du)(du)為60°時(shi)，在(zai)1523 cm處可以(yi)看到(dao)峰值 ? 1，對應(ying)(ying)(ying)于(yu)β片。 光譜(pu)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)其他譜(pu)帶(dai)都(dou)不是α-螺旋(xuan)或β-片的(de)(de)(de)(de)特征(zheng)。 光譜(pu)表明HI在(zai)空氣(qi)中(zhong)以(yi)α-螺旋(xuan)的(de)(de)(de)(de)形式存在(zai) ? 水界面。 在(zai)10 mN m的(de)(de)(de)(de)恒定(ding)壓力下，隨著角(jiao)度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)增(zeng)加 ? 1，發現光譜(pu)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)α-螺旋(xuan)特征(zheng)減少。

圖9顯示了在(zai)(zai)(zai)不(bu)同表(biao)面(mian)壓(ya)力(li)下獲得的(de)(de)HI-Langmuir單層膜的(de)(de)s偏振輻照度。 在(zai)(zai)(zai)1 mN m的(de)(de)表(biao)面(mian)壓(ya)力(li)下 ? 1，在(zai)(zai)(zai)1650 cm處(chu)(chu)存(cun)在(zai)(zai)(zai)一條(tiao)帶(dai)(dai) ? 1對應(ying)于(yu)(yu)(yu)α-螺(luo)(luo)旋(xuan)。 隨(sui)著表(biao)面(mian)壓(ya)力(li)的(de)(de)增加，該條(tiao)帶(dai)(dai)消(xiao)失，并在(zai)(zai)(zai)1666 cm處(chu)(chu)并入該條(tiao)帶(dai)(dai) ? 1. 這條(tiao)帶(dai)(dai)子長1666厘米(mi) ? 1包括β-轉角(jiao)和(he)α-螺(luo)(luo)旋(xuan)。 這條(tiao)帶(dai)(dai)子有(you)1694厘米(mi)長 ? 1對應(ying)于(yu)(yu)(yu)β片。 這條(tiao)帶(dai)(dai)子在(zai)(zai)(zai)1519厘米(mi)處(chu)(chu) ? 1也對應(ying)于(yu)(yu)(yu)α-螺(luo)(luo)旋(xuan)。 在(zai)(zai)(zai)入射角(jiao)為60°的(de)(de)情(qing)況下，在(zai)(zai)(zai)1670處(chu)(chu)觀察(cha)到的(de)(de)能帶(dai)(dai)可歸(gui)屬于(yu)(yu)(yu)存(cun)在(zai)(zai)(zai)于(yu)(yu)(yu)β-轉角(jiao)中的(de)(de)空間約束(shu)C=O部分，或者(zhe)由于(yu)(yu)(yu)β-薄片中的(de)(de)躍遷(qian)偶極耦合而(er)注意(yi)到峰(feng)值中的(de)(de)分裂。 當改變表(biao)面(mian)壓(ya)力(li)時，最強烈的(de)(de)譜(pu)帶(dai)(dai)出現(xian)在(zai)(zai)(zai)1554和(he)1539厘米(mi)處(chu)(chu) ? 1，兩條(tiao)帶(dai)(dai)均對應(ying)于(yu)(yu)(yu)酰胺II區的(de)(de)α-螺(luo)(luo)旋(xuan)。 所有(you)三(san)條(tiao)主(zhu)譜(pu)帶(dai)(dai)都表(biao)明(ming)HI-Langmuir單層的(de)(de)s極化輻照度中存(cun)在(zai)(zai)(zai)α-螺(luo)(luo)旋(xuan)。

表2。 α螺旋和β片的主帶(dai)位置特征(zheng)及酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ的紅外振(zhen)動

從上述CD、FTIR和IRRAS數據(ju)可以(yi)得(de)出(chu)結(jie)論(lun)，溶解(jie)在pH 2中的HI在溶液和空氣中以(yi)螺旋構象(xiang)存在 ?

人胰島素的朗繆爾單分子層膜的表面化學和光譜學性質——摘要、介紹

人胰島素的朗繆爾單分子層膜的表面化學和光譜學性質——實驗部分

人胰島素的朗繆爾單分子層膜的表面化學和光譜學性質——結果和討論

人胰島素的朗繆爾單分子層膜的表面化學和光譜學性質——結論、致謝！